免疫层析工艺常见问题及解决方案

---

Q1：用候选抗体检测赋值样本时灵敏度低，cut off值区间测不到。

方案：

1.通过换用大粒径标记物，增加标记抗体和包被抗体的用量；如果采用的是竞争法测抗原，可以抗原用来标记，抗体用来包被，用独立质控系统。
2. 抗体本身性能达不到要求，更换原料。

Q2：用候选抗体检测样本时高值样本测不到怎么办？

方案：

1.此项目临床上测定区间多少，如果灵敏度较高可以考虑稀释一定倍数再测定。
2.线性上不去很有可能是标记抗体和包被抗体的用量不合适，理论上用量不足，但实际应用时并不一定，建议对标记抗体和包被抗体设置梯度进行调试。
3.换用小粒径的标记物，小粒径的标记物比表面积大，结合的抗体量更多。
4.抗体亲和性不佳，更换原料。

Q3：用候选抗体检测已赋值的临床样本，相关性指标较差。

方案：

1.样本来源及赋值数据是否可靠？样本是否新鲜？有条件的话可以用对照试剂盒对样本进行检测，以确定样本的实际数值是否发生改变。
2.样本中存在干扰成分，需筛选合适的阻断剂。

Q4：标记好的抗体，封闭完了放在储存液里，一两天后有沉淀。

胶体金或是荧光微球标记后的抗体时间久了出现轻微沉淀很正常，涡旋或是水浴超声沉淀即可消失，如果出现结块沉淀，超声后仍无法去除，则可能存在以下问题：
1.标记体系中pH值不合适，导致在标记时就出现聚沉的现象，设置pH梯度进行调试
2.封闭剂的成分或是用量不合适，导致金颗粒或是微球表面有裸露位点，在储存时出现交联聚集；调整封闭剂用量或更换封闭剂（厂家、种类）再测试。
3.储存液不合适，导致偶联的复合物不稳定出现解离，需重新配制储存液。

Q5：为了提升试纸条检测上限，T线提升了包被用量，为什么信号并没有增加？

NC膜结合蛋白的量是有限的，超过上限后多余的蛋白没有结合或结合的不牢固，甚至会造成蛋白的堆积，形成空间位阻效应，致使检测时信号会不再增加甚至降低。在调整工艺时，需要根据测试结果选择合适的包被用量。

Q6：阴性组用样本稀释液进行测试，T线出现假阳性是因为什么？

这种假阳是由于标记物和包被的蛋白非特异性结合造成的，项目中很常见，可从以下几个方面解决：
1.在标记时更换封闭剂成分或是增加用量。
2.在不影响试剂灵敏度的情况下，降低标记和包被抗体用量，将整体信号压下来，来消除这种本底信号。
3.增加离子浓度，或更换稀释液，改用其他体系进行尝试。