体外诊断试剂原料FAQ

1.欧凯生物提供体的体外诊断原料是天然蛋白还是重组蛋白？

南京欧凯生物IVD原料大部分都是通过体外重组表达得到，将基因片段连接载体通过原核/真核表达系统体外重组表达获得的用于体外诊断的抗原/抗体原料；部分IVD原料为天然蛋白，例如C反应蛋白（CRP）。

2.抗原诊断原料的表达系统是什么？

表达系统主要有大肠杆菌（E.coli）表达系统和哺乳动物细胞表达系统。

3.欧凯生物的抗原诊断原料可以作为哪些应用？

我们的抗原诊断原料可以用于制备校准品、质控品，作为免疫原。

4.欧凯生物的IVD试剂原料适用于哪些平台？

我们的IVD诊断原料可以应用于胶体金、免疫荧光、免疫比浊、化学发光平台，以上平台是我们获得原料后会进行验证的平台。

5.抗原抗体诊断原料的状态都是冻干粉吗？

欧凯生物的原料大都是以冻干粉的形态保存，可以更好的保证原料的稳定性与活性。

6.欧凯生物的IVD试剂原料的验证项目有哪些？

我们的体外诊断试剂原料在经过SDS-PAGE、WB等验证外，还会制备成试纸条，用临床样本对其线性范围、灵敏度、定标曲线、比对分析等验证。

7.抗体诊断原料的研发路线是什么？

欧凯生物的抗体研发路线：

a.抗原制备；

b.抗原免疫小鼠；

c.融合细胞，制备杂交瘤细胞；

d.阳性杂交瘤细胞测序，获得轻链、重链基因序列；

e.重组抗体的体外表达。

8.体内与体外表达抗体诊断原料有什么区别？

体内制备是指通过免疫宿主的方式制备单克隆抗体或多克隆抗体，体外表达是通过重组方式制备重组单抗。体外重组表达在产量、生产周期和多样性等方面相比于传统的杂交瘤方法均有明显优势。此外，该方法还可以跳过免疫系统，在不经过免疫动物的情况下直接获得特定的抗体。
以下总结了多克隆抗体、单克隆抗体、重组抗体的特点：

	多克隆抗体	单克隆抗体	重组抗体
制备
生产周期	最少6周	最少4个月	文库建立：1-6月文库筛选：数周
免疫源纯度	高纯度	无严格纯度要求	可跳过免疫源
特殊设备	动物饲养和证书	动物饲养、证书和组织培养基	分子生物学标签
产品特征
浓度	10-30mg/ml	腹水2-10mg/ml	可高达4g/ml
产量	每只兔子可提供100ml抗血清	无限	无限
化学价	IgG二聚体	IgG二聚体	单聚体，但是可以通过基因工程进行多聚化
主要杂质	血清中的杂蛋白	培养上清的BSA（可以使用无血清培养基避免）腹水：其它鼠源杂蛋白	细菌蛋白
亲和力	异质	均质	均质
特异性	识别多种抗原决定簇	识别单抗原决定簇	识别单抗原决定簇
后期改造
批间差异	每批血清中存在差异	抗体性能基本一致，浓度可能不一样	抗体性能基本一致，浓度可能不一样
亲和力改造	可持续性高，但是空间小	基本固定	可通过基因工程提高100倍
基因改造	不可行	不可行	可行
专利限制	无	有	有
主要优势	成本低，工艺简单	特异性高	可进行基因改造，转产快速，可跳过免疫源免疫
主要缺点	特异性和产量受限	不能产生人抗体	初代抗体活性可能偏低，载体稳定性可能不足，技术门槛高

9.抗原的纯化方法有哪些？

抗原一般都带有6*His标签，通过镍柱进行亲和纯化。

10.ProteinA/G亲和纯化的原理？

抗体通过proteinA/G，SEC纯化

蛋白A（protein A）来源于金黄色葡萄球菌，它含有5个可以和抗体IgG分子的Fc段特异性结合的结构域。ProteinA作为亲和配基被偶联到琼脂糖基质上，可以特异性的和样品中的抗日分子结合，而使其他杂蛋白流穿，具有极高的选择性。1个proteinA分子至少可以结合2个IgG。

蛋白G（protein G）是一种源自链球菌G族的细胞表面蛋白，为三型Fc受体。其通过类似与proteinA的非免疫机制与抗体的Fc段结合。ProteinG可以广泛、更强地结合多类型的IgG，多克隆IgG及人IgG，同时血清蛋白结合水平更低，纯度更高，配基脱落也相对较低。此外，proteinG还可以和某些抗体的Fab和F（ab’）2段结合。

11.欧凯生物的抗体识别抗原表位的信息是否已知？

抗体识别抗原表位的信息是已知或验证已知的。

12.欧凯生物的抗体是否是配对抗体？

欧凯生物提供的抗体诊断原料大多是已经配对好的抗体。

13.如何知道欧凯生物的抗体是用作检测抗体还是捕获抗体呢？

抗体是用作检测抗体还是捕获抗体，可以参考具体项目的说明书。

14.欧凯生物的抗体是否可以用于制备Fab片段？

欧凯生物的重组抗体可以用于制备Fab片段。