稳定细胞系构建服务

稳定细胞系（Stable cell line），是指质粒或基因片段整合到哺乳动物细胞的染色体上，通过整合质粒或基因片段的抗性标志来筛选得到的细胞，往往能够稳定表达特定的蛋白质和抗体，适用于稳定生产或研究，也是IVD原料理想的稳定供应平台。

欧凯生物推出稳定细胞系构建服务，凭借先进的技术和专业知识可以显着减少开发用于生产重组蛋白和抗体的高性能哺乳动物细胞系的时间，精力和成本。我们的稳定细胞系构建服务为广大的研发人员解决如下问题：

缺乏各类重组蛋白或重组单抗稳定生产的细胞系；

重组蛋白或重组抗体的产能不足或不能长期生产；

已构建的细胞系稳定性不足。

服务内容

稳定细胞系构建

为什么要开发稳定细胞系？

稳定细胞系能够“稳定地”表达受控基因，并可以实现多于或低于基因生理正常水平的表达。与此同时，细胞系可以长时间内连续生长，而表达水平没有显着变化。所以其已广泛用于：

重组抗体生产

重组蛋白生产

基因的功能研究

药物筛选

诊断或治疗目的

与瞬时转染的区别

瞬时转染的细胞表达外源基因，但不将其整合到基因组中。因此，新基因不会被复制。取决于所用的构建体，这些瞬时转染的基因只能在细胞内停留有限的时间（通常是几天内），之后外源基因通过细胞分裂或其他因素丢失。因此，瞬时转染的周期更短，花费也更低，适用于短期内小规模重组抗体或重组蛋白的表达。

开发稳定细胞系的流程

稳定细胞系适用于制备用于诊断、治疗或预防目的的重组蛋白质，重组抗体或疫苗。制备这些试剂的稳定细胞系，其构建过程需要漫长的周期、专业的技能和坚实的知识，欧凯生物的稳定细胞系构建服务正是其中的典范，构建过程如下：

转染。转染方式同瞬时转染类似，一般选取成功率较高的电穿孔法。经过转染，需要通过筛选大量细胞，以确保目的基因整合到宿主细胞的基因组。

细胞池筛选。通常使用选择性标记筛选到稳定转染的细胞，常见的手段是：二氢叶酸还原酶（DHFR）或谷氨酰胺合成酶（GS）方法。以GS方法为例，通过在培养基中添加L-氨基亚砜蛋氨酸（MSX）抑制细胞谷氨酸的合成，只有高拷贝的GS基因整合到基因组上才能维持细胞对谷氨酸的需求，从而获得稳定转染的宿主细胞。

加压筛选。经过初步筛选和评估，选取表达量最高的几个克隆。使用浓度不断增加的MSX梯度培养基，从而筛选出含高拷贝目的基因的细胞，收获稳定的高产量细胞株。

测试。通过稳定性测试、批次测试、支原体测试等全方面评估细胞系。经过测试后的稳定细胞系会最快速度发货给客户。

参考文献