胶乳增强比浊法的简介及常见问题解决方法

1. 胶乳比浊法的定义、原理和分类

胶乳增强比浊法是目前比浊试验中应用范围最广、最多的方法。当待测抗体遇到相应的抗原时，会发生聚集，形成浊度。胶乳增强比浊法则是针对复合物过少无法形成浊度的问题，衍生出一种方法，原理是将抗体吸附在直径为60-300nm，甚至是300nm以上的微球颗粒上，增加抗原抗体的免疫复合物，从而增大信号形成浊度。通过光强度的变化即可计算出待测标本中抗原的含量（始终保持抗体过量）。胶乳增强比浊法根据检测方法的不同可分为透射增强比浊法和散射增强比浊法，透射增强比浊法是根据光线透过浑浊介质时，光线被吸收和反射的量来计算抗原的量，光减少的量与抗原的量成正比；散射胶乳比浊法则是一定波长的光线沿水平轴照射，通过浑浊溶液，光线发生折射，光线偏转的角度与复合物的含量成正比。

2. 胶乳增强比浊法常见的问题

问题1 蛋白无法吸附在微球上。

解决方法：加入更多的蛋白；去除微球中的表面活性剂，释放其占据的蛋白结合位点；引入中间物，将微球与蛋白相连；改变缓冲剂。

问题2 标记时加入大量的蛋白，但是仍然无活性。

解决方法：改变蛋白的加入量，从而改变蛋白与微球结合的空间构象；使用表位稀释物，占据微球上的部分蛋白结合位点，防止蛋白靠的太近。

问题3 清洗去除未吸附蛋白后，微球聚集。

解决方法：增加蛋白标记量或封闭剂的用量，防止有空余位。

问题4 标记后开始活性很好，储存一段时间后，活性降低。

解决方法：降低储存温度到2~8度；降低储存液的封闭剂浓度，防止抗体被替换；确认储存液中无能与抗体竞争的杂质，防止长时间取代抗体，尝试使用其他缓冲剂，调试PH；加入乳胶保护剂等。

问题5 PS微球与蛋白（抗体）交联后，当时没有发现凝集，但隔夜后发现有凝集。

解决方法：可以加一些缓冲液解决，常见的是BSA；也可以提高微球的交联率。

问题6 EDC活化羧基乳胶微球后，加蛋白（抗体）即时有沉淀出现。

解决方法：换质量好的EDC；适当的调低缓冲液的PH值；减少EDC用量和调整活化时间。

参考文献

[1]李金明、刘辉，临床免疫学检验技术（第6版），人民卫生出版社， 2015：55-70.
[2]陆雪龙, 陈崇华, 任宏英. 浅谈速率散射免疫比浊法和速率抑制免疫比浊法[J]. 临床检验杂志, 1985(04):207.
[3]桂汉南. 透射免疫比浊法测定多种蛋白成份[J]. 上海医学检验杂志, 1989(03): 161-163.