猴痘病毒（MPXV）的检测方法

猴痘病毒（Monkeypox virus, MPXV）与天花、牛痘属于正痘病毒属（Orthopoxvirus genus）。1970年9月1日，在刚果民主共和国（当时称为刚果共和国）的巴桑库苏医院首次发现了人类MPXV病例。猴痘病毒主要由啮齿、灵长类等野生动物传播给人，并在人际间有限的传播，引起一种罕见的病毒性人畜共患病——猴痘。猴痘临床症状与天花相似，但症状较轻。猴痘早前主要发生在中非和西非靠近热带雨林的偏远地区，随着对人类的适应MPXV逐渐演化为：中非（刚果盆地）和西非两个进化枝，其中刚果盆地分支毒性和传播能力更强。

猴痘病毒介绍

猴痘病毒是一种有包膜的双链DNA病毒，对宿主细胞DNA和RNA复制的依赖程度很低，可在宿主细胞质中复制。与同属病毒相似，MPXV很可能在宿主细胞质中复制形态独特的胞内成熟病毒（IMV）和胞外包膜病毒（EEV）。IMV具有坚固的物理结构，便于在宿主之间传播，而更脆弱的EEV被包膜包裹，限制宿主免疫清除，因此适合病毒在细胞间传播。MPXV能有效地感染人原代单核细胞，通过抑制CD4+和CD8+ T细胞活化，消除局部T细胞反应，避免全身免疫抑制及免疫监测。

猴痘病毒临床诊断

猴痘的最佳诊断样本来自皮肤病变——囊泡和脓疱液体，以及干燥的结痂。病变样本必须储存在干燥、无菌的试管中（无病毒运输介质）并保持低温。猴痘的临床诊断必须考虑其他皮疹疾病如：水痘、麻疹、细菌性皮肤感染、疥疮、梅毒和药物相关过敏。发病前期的淋巴结病可能是区分猴痘与水痘或天花的唯一临床特征。

1.1 电镜活检

电镜下MPXV呈胞浆内砖状，有侧体，中心核约200-300 nm。由于OPV物种在形态上无法区分，该方法不能确定诊断，但可以提示该病毒属于痘病毒科。

1.2 基因检测

1.2.1 实时荧光定量PCR

对临床、MPXV感染细胞培养物的MPXV DNA进行常规检测，使用PCR或real-time PCR，建议在生物安全三级设施中进行。采用real-time PCR方法针对细胞外包膜蛋白基因（B6R）、DNA聚合酶基因、E9L的保守区，DNA依赖RNA聚合酶亚基18、rpo18和F3L基因进行检测。

1.2.2 限制性内切酶片段长度多态性（RFLP）

PCR扩增基因或基因片段的限制性长度片段多态性（Restriction length fragment polymorphism, RFLP）也可用于MPXV DNA的检测，但RFLP费时且需要病毒培养。PCR产物的RFLP也需要酶切后进行凝胶电泳，在快速、敏感和特异性至关重要的临床环境中可能不是最佳的方法。

1.2.3 高通量测序技术（NGS）

采用NGS技术的全基因组测序仍然是区分MPXV和其他正痘病毒（OPV）表征的金标准，但该技术成本较高，测序数据的下游处理需要巨大的计算能力。因此，在撒哈拉以南非洲资源贫乏的国家NGS可能不是合适方法。

基因检测技术中real-time PCR仍是MPXV常规诊断的首选方法，但必须辅以现场基因组测序技术，如Oxford Nanopore MinION，才能提供实时的病毒基因组数据，这对于循证流行病学干预是必不可少。

1.3 免疫检测方法

猴痘病毒免疫检测方法主要包括酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IgG、IgM抗体和免疫组化检测病毒抗原。用MPXV抗体进行免疫化学分析，可区分痘病毒感染和疱疹病毒。

已经证实，抗病毒抗体和T细胞反应在疾病发作前后增加，在皮疹发生后5天左右和8天以上的血清中分别检测到猴痘病毒IgM和IgG。如果有皮疹和严重疾病史的未接种疫苗的个体血清中存在IgM和IgG抗体，则诊断可能存在MPXV感染。IgM捕获ELISA阳性表明最近接触过MPXV，而IgG捕获ELISA阳性表明该个体以前通过接种疫苗或自然感染接触过MPXV。在一个样本中同时存在IgM和IgG，表明在以前接种过疫苗或接触过自然感染MPXV的个体。然而，正痘病毒具有血清学交叉反应性，抗原和抗体检测方法不能提供猴痘特异性确认，但对于MPXV流行地区的血清学检测也许是可行的方法。

参考文献

[1] Sarah Keasey, Christine Pugh, Alexander Tikhonov, et al. Proteomic Basis of the Antibody Response to Monkeypox Virus Infection Examined in Cynomolgus Macaques and a Comparison to Human Smallpox Vaccination[J]. Plos one, 2010, 5(12): e15547.
[2] Emmanuel Alakunle, Ugo Moens, Godwin Nchind, et al.Monkeypox Virus in Nigeria: Infection Biology, Epidemiology, and Evolution[J]. Viruses, 2020, 12(11):1257.
[3] Erika Hammarlund, Anindya Dasgupta, Clemencia Pinilla, et al. Monkeypox virus evades antiviral CD4+and CD8+T cell responses by suppressing cognate T cell activation[J]. Proc Natl Acad Sci USA, 2008, 105(38): 14567-72.