免疫层析工艺常见问题及解决方案

Q1:用候选抗体检测赋值样本时灵敏度低,cut off值区间测不到。

方案:

1.通过换用大粒径标记物,增加标记抗体和包被抗体的用量;如果采用的是竞争法测抗原,可以抗原用来标记,抗体用来包被,用独立质控系统。
2. 抗体本身性能达不到要求,更换原料。

Q2:用候选抗体检测样本时高值样本测不到怎么办?

方案:

1.此项目临床上测定区间多少,如果灵敏度较高可以考虑稀释一定倍数再测定。
2.线性上不去很有可能是标记抗体和包被抗体的用量不合适,理论上用量不足,但实际应用时并不一定,建议对标记抗体和包被抗体设置梯度进行调试。
3.换用小粒径的标记物,小粒径的标记物比表面积大,结合的抗体量更多。
4.抗体亲和性不佳,更换原料。

Q3:用候选抗体检测已赋值的临床样本,相关性指标较差。

方案:

1.样本来源及赋值数据是否可靠?样本是否新鲜?有条件的话可以用对照试剂盒对样本进行检测,以确定样本的实际数值是否发生改变。
2.样本中存在干扰成分,需筛选合适的阻断剂。

Q4:标记好的抗体,封闭完了放在储存液里,一两天后有沉淀。

胶体金或是荧光微球标记后的抗体时间久了出现轻微沉淀很正常,涡旋或是水浴超声沉淀即可消失,如果出现结块沉淀,超声后仍无法去除,则可能存在以下问题:
1.标记体系中pH值不合适,导致在标记时就出现聚沉的现象,设置pH梯度进行调试
2.封闭剂的成分或是用量不合适,导致金颗粒或是微球表面有裸露位点,在储存时出现交联聚集;调整封闭剂用量或更换封闭剂(厂家、种类)再测试。
3.储存液不合适,导致偶联的复合物不稳定出现解离,需重新配制储存液。

Q5:为了提升试纸条检测上限,T线提升了包被用量,为什么信号并没有增加?

NC膜结合蛋白的量是有限的,超过上限后多余的蛋白没有结合或结合的不牢固,甚至会造成蛋白的堆积,形成空间位阻效应,致使检测时信号会不再增加甚至降低。在调整工艺时,需要根据测试结果选择合适的包被用量。

Q6:阴性组用样本稀释液进行测试,T线出现假阳性是因为什么?

这种假阳是由于标记物和包被的蛋白非特异性结合造成的,项目中很常见,可从以下几个方面解决:
1.在标记时更换封闭剂成分或是增加用量。
2.在不影响试剂灵敏度的情况下,降低标记和包被抗体用量,将整体信号压下来,来消除这种本底信号。
3.增加离子浓度,或更换稀释液,改用其他体系进行尝试。