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SAA抗体制备

SAA是一种急性时相蛋白,当炎症或感染急性期在体内含量迅速升高,当感染得到控制后又会迅速恢复至正常水平,是常见的炎症标志物。对体内SAA水平进行检测对于细菌及病毒感染的诊断具有重要的指导意义。

SAA抗体是SAA检测试剂盒的核心原料,目前SAA抗体的制备可以分为利用杂交瘤技术制备和利用基因工程制备两大类,两种生产方式在制备周期、实验难度、抗体产量等方面有所区别,本文就SAA抗体的制备相关知识点做一个介绍。

杂交瘤技术制备SAA抗体

杂交瘤技术是目前主流的SAA抗体制备方式,利用SAA抗原蛋白免疫宿主(通常为Balb/c小鼠),对宿主进行4-5次免疫后取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合得到杂交瘤细胞。再对杂交瘤细胞进行阳性克隆筛选及单克隆筛选得到杂交瘤细胞单克隆。得到杂交瘤单克隆细胞株后,对细胞株进行培养(可以将单克隆细胞株注入小鼠腹水进行体内培养,也可以利用培养瓶进行体外培养)即可得到鼠源SAA单克隆抗体。

对于免疫荧光、胶体金、胶乳比浊等免疫检测平台,仅仅有一株SAA抗体是不够的,至少需要一对能够同时与SAA蛋白结合的配对抗体才能够完成对SAA蛋白的检测。因此,需要筛选得到多株单克隆杂交瘤细胞株并制备得到多种不同的SAA单抗,利用双抗夹心ELISA的方式进行配对抗体的筛选。

基因工程技术制备SAA抗体

利用杂交瘤技术制备SAA存在杂交瘤细胞退化及批次产量少等问题,利用基因工程技术可以很好的解决这些问题。

体外重组技术制备重组SAA抗体首先需要获得SAA的抗体序列(通过对杂交瘤细胞进行测序即可获得SAA抗体序列),抗体序列合成基因并将基因导入到载体之中构建表达质粒,将构建好的质粒转入到合适的表达系统中(通常为哺乳动物细胞表达系统)进行重组表达,最后通过protein A/G纯化得到重组SAA单抗。

与杂交瘤细胞相比基因序列是可以永久保存的,不用担心因杂交瘤细胞退化而导致无法生产抗体的问题。

哺乳动物细胞表达系统

哺乳动物细胞表达系统分为瞬时转染和稳定细胞系构建两种制备方式。瞬时转染能够快速的表达得到SAA抗体,但是产量较低。稳定细胞系构建的实验周期比瞬时转染长,实验难度也较大,但是利用稳定细胞系构建技术能够实现SAA抗体的长期、稳定、大量的生产。

如果SAA抗体的需求量很大,利用瞬转技术需要进行多个批次的制备才能够满足需求,此时会存在批间差的问题,但是利用稳定细胞系构建则能很好的满足客户的需求(可一次性生产克级至百克级SAA抗体)。

杂交瘤技术与基因工程技术对比

  杂交瘤技术 基因工程
原料 SAA抗原 SAA抗体序列
生产方式 免疫动物 重组表达
周期 4-6月 2-4月
优点 技术门槛较低 产量高、批次间差异小
缺点 得到抗体可能夹带小鼠自身抗体(比例约为10%) 技术门槛高
产量 可快速小量生产,也可大量生产
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