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心肌肌钙蛋白(cTnI)检测方法及注意事项

cTnI检测方法

心肌肌钙蛋白(cTnI)作为判断心肌细胞受到损害的“金指标”,已被广泛应用于临床中, 但由于cTnI在外周血中既有游离形式,又有cTnI-cTnC、cTnI-cTnT等不同形式的复合物存在,加之不同生产企业间的抗血清与不同形式中的cTnI反应存在一定程度上的差异,以至于测定结果不一致;目前临床测定cTnI的方法尚无统一标准,且测定结果由各厂家自定,优劣难分。目前对cTnI的体外诊断试剂检测方法学有化学发光法、胶体金法、免疫层析定量法等。化学发光法测定cTnI成本昂贵,难以在基层实验室开展;胶体金法成本较低,适用于急诊、床旁检测以及初筛检测。而就特异性、误诊率与总符合率方面而言,免疫层析分析法的特异性、误诊率和总符合率等均优于其他两种检测方法,说明免疫层析分析法具有更好的临床符合性,应是cTnI体外诊断试剂盒的首选检测方法。同时免疫层析分析法还具有不需要大型仪器设备、操作快速简便、可以提供床旁检验等优点满足了临床对检验速度的要求。因此,对 AMI 患者可采用免疫层析定量法进行快速初筛,同时结合体外诊断试剂胶体金法检测,可为临床提供更可靠、准确的诊断依据,为临床监测治疗效果提供理论支持。

cTnI检测注意事项

不同的检测方法对同一样本的检测值为什么会有那么大的差别呢?主要是由于所用的诊断抗体原料特异性不同。心肌肌钙蛋白(cTnI)在人体内的存在形式多种多样,而不同试剂的抗体检测的到底是什么?有几点需要考虑:

1. 复合体问题

肌钙蛋白Tn是肌肉收缩的调节蛋白,TnI与另两个亚基TnC、TnT的结合常数分别为1.5*108(有Ca2+存在时)和4.4*105。有研究者提出,人体内的cTnI先以TnI-TnC-TnT的形式释放人到血液里,不久之后降解成TnI-TnC复合体形式和TnT,所以,病人血清中的cTnI大部分是以TnI-TnC复合体形式存在的,而用提纯的或者基因重组表达的cTnI抗体,有的并不能识别它的复合体形式,有的却与复合体的亲和力比与cTnI单体的更强。所以能够精确测定cTnI单抗必须既能识别cTnI的游离单体,又能识别它的复合体,而且对复合体造成的影响不敏感。

2. 水解问题

TnI是个极易水解的分子,在心肌坏死过程中,心肌细胞线粒体中的各种蛋白水解酶会释放出来,使得心肌肌钙蛋白(cTnI)处于极易水解的环境中。目前尚不清楚cTnI水解的具体时间和参与其水解的具体酶。In vitro试验表明,20h后,坏死组织中的cTnI只有1%-3%保持完整,Morjana的试验表明cTnI在血液中C端先被降解,产物的一部分从N端被降解,最终得到两个主要的水解产物,分子量分别为18kd和14kd。总体来说,中间部分28-110残基是稳定区域。Shi的研究发现,中间部分前半段的稳定得益于它本身的一级结构,后半段的稳定则是由于TnI-TnC复合体中TnC的保护。Shi还在试验中对比了不同的cTnI检测试剂,发现所用抗体有的识别cTnI的N端,有的识别C端,有的识别中间部分。现在,研究者和生产者的共识是检测cTnI的抗体应该针对它稳定的中间区域。

3. 磷酸化问题

心肌肌钙蛋白(cTnI)分子的第22和23个残基是两个Ser,它们在体内都可以被Kinanse A磷酸化,所以理论上在梗死病人的血液中存在cTnI分子的4种磷酸化形式:未磷酸化态、22Ser磷酸化态、23Ser磷酸化态和22、23Ser均磷酸化态。Katrukha等用免疫方法证明,病人血清中确有相当一部分cTnI呈磷酸化态,而Marston等通过放射性试验发现,受损心肌中磷酸化态的cTnI比正常心肌中要少。磷酸化会大大改变cTnI分子的构象,从而影响一些抗体与它结合。

4. 氧化还原形式问题

心肌肌钙蛋白(cTnI)含有两个Cys残基(Cys-79和Cys-96),其中巯基的氧化会影响TnI与其他Tn亚基的结合,也可能影响与单抗的结合。在体内释放的cTnI既有氧化形式又有还原形式。Wu等曾经发现,一些检测试剂对氧化形式的cTnI识别能力更强,大多数试剂则对两种形式的识别没有区别。专家指出,用于检测的抗体应该不抗第79和第96个残基,并且既识别氧化形式又识别还原形式。

参考文献
[1] 张轲. 人心肌肌钙蛋白I的几种检测方法及其应用价值分析[J]. 临床研究, 2016, 24(3):193-194.
[2] 韩雪松, 李强, 丛进阳. 心肌肌钙蛋白I检测及临床诊断标准化进展[J]. 中华检验医学杂志, 2004, 27(3).
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