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体外诊断试剂原料评估指标
--抗原诊断原料

抗原作为体外诊断试剂核心原料对于整个免疫检测分析系统有着重要的作用。抗原诊断原料可以用于制备校准品、质控品、标准品,还可以作为免疫原制备抗体。目前,衡量抗原诊断原料质量的技术指标没有统一的标准,一般以活性,纯度,批间差,稳定性等作为抗原诊断原料的评估指标。

抗原分类

抗原诊断原料分为三类:天然抗原,重组抗原,合成多肽抗原。天然抗原是从动物组织或微生物体外等提取纯化出来的抗原;重组抗原是指在将抗原基因链接载体转入原核或真核细胞中,体外重组表达纯化得来的;合成多肽抗原是以合成小肽作为抗原,通常需要链接载体来增加其免疫原性。
以下是天然抗原、重组抗原、合成抗原的优缺点:
分类 优点 缺点
天然抗原 天然序列,抗原表位全面 过长的抗原序列带来可能的非特异性结合;微生物有可能出现突变株;产量受来源影响
重组抗原 人工设计序列,突出重点表位;产量大,可控制,易提纯,可加上标签利于检测 一般只有线性表位,空间表位几乎没有;易聚集
合成抗原 纯度高;特异性好 需要偶联后吸附;产量小

抗原活性

抗原活性的检测需要和天然抗原进行比对。通常,重组抗原的基因序列、氨基酸组成、分子量大小与天然抗原是一样的。抗原的决定簇可能是由一级结构决定的线性连续的,也可能是由三级结构决定的不连续的空间构象。线性表位即使蛋白变性,也具有免疫原性;而构象表位只有在空间结构完整的情况下才具有免疫原性。因此,抗原诊断原料的生物活性与表位信息有关,如果是线性表位,则与活性没有很大关系;如果是构象表位,则需要抗原蛋白的正确折叠,保证其活性,才能与相应抗体特异性结合,避免产生假阳性。

纯度

抗原的纯度可以用SDS-PAGE或HPLC进行测定,抗原诊断原料的纯度最好大于95%。抗原与抗体一样,也会需要标记,当其纯度不够时,可能会影响标记效率,从而影响特异性、反映信号、背景值等。同时,抗原纯度不够,其免疫效率也会降低,影响抗体的制备。

批间差

是指每批次产品的可重复性。重复性则是保证体外诊断试剂降低批间差异并且稳定生产的前提条件。重复性和生产工艺密切挂钩,因此也是体现抗原诊断原料质量的关键指标。

稳定性

稳定性作为体外诊断试剂保持产品安全有效的重要指标,对产品的生产、运输、保存和使用等环节具有重要的指导意义。抗原诊断原料并不像抗体那么稳定,需要特定的Buffer进行储存,通常Buffer包括BSA、尿素、甘油、蛋白保护剂等。多数供应商提供的抗原的储存条件为-20℃或-70℃,或4度储运的冻干粉,并强调抗原稀释分装后应冷冻保存。查看更多

选购抗原诊断原料时一般注意以下几点:

1.外观
大部分抗原原料为澄清均一的液体,不含异物、浑浊或颗粒;或为白色粉末,不含其它杂质。
2.纯度和分子量
抗原诊断原料的纯度与分子量测定与抗体一致。主要方法是SDS-PAGE电泳后经考马斯亮蓝或者银染色法进行染色,然后对条带进行扫描分析。此外,高效液相层析也可以用于纯度和分子量测定。作为体外诊断试剂用的IVD原料,用银染法染色后,纯度一般要大于90%;用考马斯亮蓝染色后,纯度一般都要大于95%。
3.生物安全性
人源抗原务必要求原料供应商确保HBsAg、HCV、HIV、TP呈阴性。
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