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体外诊断试剂原料质量控制

体外诊断试剂原料是体外诊断行业的突破点。体外诊断产品的质量很大程度上是由上游的IVD试剂原料决定的。
我国体外诊断试剂行业在我国起步较晚,属于较新兴产业,与欧美国家相比发展相对滞后。近几年我国体外诊断试剂行业已从导入期步入发展期,市场需求快速增长,国内企业抓住机遇,凭借产品性价比高和更为贴切本土市场的优势,不断抢占市场份额,使原本以进口产品为主导的原料市场格局被逐渐打破。随着国内体外诊断行业的迅速发展,创新、优质、稳定、大批量的体外诊断试剂原料公司异军突起,且越来越受到体外诊断试剂厂商的重视和青睐。但由于行业竞争激烈,部分生产厂商为了压缩生产成本从而降低了原料的质量控制,是我国目前原料生产行业质量参差不齐的重要因素。
那么,如何保证IVD原料的高质量至关重要。以下内容主要是对抗原/抗体诊断原料的质量控制进行概述。

(一)质量控制

原料质量控制:包括对于动物源品质的控制、培养基质量的控制、生物安全性检测等。IVD原料不是简单的制备蛋白,还需要考虑原料的特异性、灵敏度、批间差、纯度等性能。

细胞库质量控制:(1)抗体诊断原料的制备离不开杂交瘤细胞。杂交瘤细胞在数次传代后会出现活力逐步下降现象,若细胞株保存不善受到污染,对抗体原料的影响也很严重。因此细胞株科学的保存、复苏及传代是非常必要的。(2)目前,少数的抗原抗体诊断原料生产厂家采用采用体外重组表达的方式获得IVD原料,保证了原料的纯度、批间差等性能。表达系统包括原核表达和哺乳动物表达。

生产和纯化:抗体原料的生产方式主要分为体内培养和体外培养两种。体内培养是通过小鼠腹水培养而得,而体外培养则是通过生物反应器而得。由于动物保护问题和动物个体间的潜在差异,体外培养生产抗体可能会成为主要的生产方式。目前原料的纯化方式主要为亲和层析和离子交换层析,其中对于单抗而言,主要以protein A/G 的亲和层析为主;对于多抗,则以高纯度的抗原亲和层析为主;对于抗原,多以亲和纯化的方式。

(二)出厂质检

在《体外诊断试剂生产及质量控制技术指导原则》(征求意见稿)中对体外诊断试剂原料常规检测项目进行了概述:

外观:肉眼观察,大部分体外诊断试剂原料为澄清均一的液体,不含异物、浑浊或摇不散的沉淀或颗粒;或为白色粉末且不含有其他杂质。

纯度和分子量:主要方法是SDS-PAGE电泳后经考马斯亮蓝或者银染色法进行染色,然后对条带进行扫描分析。此外,高效液相层析也可以用于纯度和分子量测定。作为体外诊断试剂用的IVD原料,用银染法染色后,纯度一般要大于90%;用考马斯亮蓝染色后,纯度一般都要大于95%。

蛋白浓度:主要测定方法为Lowry法、OD280nm光吸收法和双缩脲法等。需要注意的是,不同方法学之间的结果存在一定差异,因此建议可以采取与原料厂商一致的方法进行验证。

抗体效价:效价的测定一般根据担保含量测定结果,通过倍比稀释法进行。效价应达到规定的要求。

功能性:包括特异性、灵敏度、稳定性、批间差、精密度等功能性分析,并比较其与上一批次原料的相关性。

参考文献
[1]谷威, 潘峰, 周飞. 体外诊断试剂行业发展概述[J]. 中国药物评价, 2012, 29(1):98-101.
[2]李耀华, 张世庆. 体外诊断试剂行业发展回顾与展望[J]. 检验医学与临床, 2017, 14(2):299-301.
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