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SRT逆转录酶(M-MLV)

产品参数

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名称 规格 货号 价格
SRT逆转录酶(M-MLV) 2000U R267n7 咨询
10000U
产品描述
SRT Reverse Transcriptase是经过基因改造的MMLV逆转录酶,通过引入突变来降低RNase H活性,改进热稳定性。SRT Reverse Transcriptase可广泛应用于RT-PCR、cDNA第一链合成等。
活性定义
以 Poly(A)/Oligo(dT)为模板/引物,在 37℃的条件下,10 分钟内催化1 nmol dTTP掺入酸不溶性物质中所需要的酶量定义为1个活性单位(unit)。
第一链cDNA合成操作步骤
1. 各组分取出后在冰上融解,涡旋混匀后瞬时离心,然后在RNase-free离心管中配制混合液:
组分 使用量
RNA模板 Total RNA≤5 μg,或mRNA≤500 ng
Oligo (dT) (50 μM)
或随机引物
或特异引物
50 pmol
或50-250 ng
或2 pmol
dNTPs (10 mM) 1 μl
RNase-free ddH2O 补充至13 μl
2. 65℃孵育5min,然后立即转至冰上孵育至少1min,短暂离心收集反应液。
3. 在上述管中配制如下反应液至总体积为20 μl。
组分 使用量
步骤1中反应液 13 μl
5 X RT Buffer 4 μl
DTT (0.1 M) 1 μl
RNase Inhibitor (40 U/μl) 1 μl
SRT Reverse Transcriptase (200 U/μl) 1 μl
使用振荡器轻轻涡旋混匀,瞬时离心后置于冰上。
4. 按照如下条件进行逆转录反应。
温度 时间
25℃*b 5min
50℃*c 30~60min
70℃ 15min
*b. 使用随机引物时,添加此步骤。
*c. 使用特异引物或GC含量高的模板以及复杂模板时,建议使用温度提高至55℃。
5. 合成的cDNA可用于后续PCR或qPCR等实验。
保存温度
-20℃或更低温度长期保存。
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