SRT逆转录酶（M-MLV）
产品参数
| 名称 | 规格 | 货号 | 价格 |
| SRT逆转录酶（M-MLV） | 2000U | R267n7 | 咨询 |
| 10000U |
产品描述
SRT Reverse Transcriptase是经过基因改造的MMLV逆转录酶，通过引入突变来降低RNase H活性，改进热稳定性。SRT Reverse Transcriptase可广泛应用于RT-PCR、cDNA第一链合成等。
活性定义
以 Poly(A)/Oligo(dT)为模板/引物，在 37℃的条件下，10 分钟内催化1 nmol dTTP掺入酸不溶性物质中所需要的酶量定义为1个活性单位(unit)。
第一链cDNA合成操作步骤
1. 各组分取出后在冰上融解，涡旋混匀后瞬时离心，然后在RNase-free离心管中配制混合液：
| 组分 | 使用量 |
| RNA模板 | Total RNA≤5 μg，或mRNA≤500 ng |
| Oligo (dT) (50 μM) 或随机引物 或特异引物 |
50 pmol 或50-250 ng 或2 pmol |
| dNTPs (10 mM) | 1 μl |
| RNase-free ddH2O | 补充至13 μl |
2. 65℃孵育5min，然后立即转至冰上孵育至少1min，短暂离心收集反应液。
3. 在上述管中配制如下反应液至总体积为20 μl。
| 组分 | 使用量 |
| 步骤1中反应液 | 13 μl |
| 5 X RT Buffer | 4 μl |
| DTT (0.1 M) | 1 μl |
| RNase Inhibitor (40 U/μl) | 1 μl |
| SRT Reverse Transcriptase (200 U/μl) | 1 μl |
使用振荡器轻轻涡旋混匀，瞬时离心后置于冰上。
4. 按照如下条件进行逆转录反应。
| 温度 | 时间 |
| 25℃*b | 5min |
| 50℃*c | 30~60min |
| 70℃ | 15min |
*b. 使用随机引物时，添加此步骤。
*c. 使用特异引物或GC含量高的模板以及复杂模板时，建议使用温度提高至55℃。
*c. 使用特异引物或GC含量高的模板以及复杂模板时，建议使用温度提高至55℃。
5. 合成的cDNA可用于后续PCR或qPCR等实验。
保存温度
-20℃或更低温度长期保存。
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