高保真PCR预混液(2×PCR Master Mix)
抗体参数
名称 | 组分 | 规格 | 货号 |
高保真PCR预混液 (2×PCR Master Mix) |
高保真酶、dNTP、Mg2+ | 1mL | M109T1 |
10mL |
产品介绍
本产品为2×浓度的PCR混合液,其除了含有PCR扩增常用的dNTP和Mg2+之外,还含有一种基于基因工程改造的新一代高保真酶,其具有极高的扩增效率和高保真性,同时增加的特殊扩增促进剂也使扩增效果进一步增加。此酶具有 5'→3'DNA聚合酶活性以及3'→5'外切酶活性,扩增产物为平末端,可用于后续同源重组等试验。
产品应用
本品适用于以基因组DNA、cDNA、质粒等模板的PCR反应。
运输与保存
-30°C~ -15°C保存,低温运输。
试验操作
- 反应体系
组分 体积(μL) ddH2O Up to 50 2×PCR Master Mix 25 模板 X 正向引物(10 μM) 1 反向引物(10μM) 1 注:模板推荐量为基因组DNA:50-150ng;质粒:5-50ng;cDNA:1-5μl(不超过反应体积的1/10),使用前请于冰上融化,震荡瞬时离心。
- 反应程序
程序 温度(℃) 时间 循环数 预变性 95 3min 1 变性 95 15s 35 退火a 根据引物而定 15s 延伸b 72 15s 延伸 72 5min 1 保存 4 ∞ 1 a.退火温度:一般设置为引物Tm值±3℃左右即可; b. 延伸时间:一般模板设置为15s/kb,对于一些困难模板,可延伸至20-30s/kb范围之间调整。
注意事项
1. 请使用高质量模板。
2. 避免反复冻融此产品,因为这会降低酶的活性。
3. 此产品仅供科研使用,不适用于临床诊断或治疗。
4. 请勿将此产品用于任何非法目的。
常见问题及解决方法
常见问题 | 可能原因 | 解决方法 |
无扩增产物或产物量少 | 引物 | 重新设计优化引物 |
退火温度 | 设置梯度,寻找合适退火温度 | |
引物浓度 | 适当提高引物浓度 | |
延伸时间 | 适当提高延伸时间 | |
循环数 | 适当提高循环数 | |
模板 | 适当增加模板量或提高模板纯度 | |
条带弥散或有杂带 | 引物 | 重新设计优化引物或适当降低引物浓度 |
退火温度 | 适当提高退火温度并寻找最适温度 | |
延伸时间 | 根据杂带大小而定,大于目的片段降低,小于目的片段提高延伸时间 | |
循环数 | 适当降低循环数 | |
模板 | 使用纯度高的模板或适当降低模板量 |