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血清淀粉样蛋白A(SAA)的检测方法

1. 放射性免疫检测法(RIA)

RIA有很高的检测灵敏度,但由于标记物具有放射性危害,标记物稳定性差,废弃物难以处理等缺点,已逐渐退出临床检验领域。

2. 酶联免疫吸附实验(ELISA)

ELISA法采用辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)或碱性磷酸酶标记抗体,并催化底物产生颜色变化,具有操作简单,试剂稳定期长的特点,但ELISA法的检测灵敏度较低,线性范围窄,目前主要应用于传染性疾病筛查等对检测灵敏度要求较低的项目。

实验原理

用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗SAA抗体的微孔中依次加入SAA抗原标本或标准品、生物素化的抗SAA抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMD显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色。并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的SAA蛋白呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。

3. 乳胶免疫比浊法

乳胶免疫比浊法是利用抗原抗体反应原理测定血清中SAA蛋白的含量,此方法无法兼顾灵敏度和线性。

透射比浊法:免疫透射比浊法检测SAA是沿光源的光路方向测量透射光强度和被检测溶液微粒浓度关系。

散射比浊法:不同于透射比浊法,散射浊度法是检测激光通过溶液时光线被粒子颗粒折射、偏转的情况确定抗原抗体复合物颗粒大小和浓度。一些特定蛋白分析仪具有抗原过剩自动检测功能,当样本中出现SAA过剩时,特定蛋白分析仪能够实现自动稀释再检测,防止钩状效应影响检测结果。

4. 胶体金斑点渗滤法

胶体金斑点渗滤法是应用微孔滤膜作载体,先将抗原/抗体点于膜上,封闭后加待检样本,洗涤后用胶体金标记的SAA抗体检测相应的抗原/抗体。

5. 免疫层析法

免疫层析法是采用胶体金、荧光微球、吖啶酯等作为标记物,以免疫层析方法,配合使用免疫分析仪,实现检测人血清、血浆和全血样本中SAA蛋白的含量。目前,市场上常见的免疫层析法有:胶体金定量免疫层析法,荧光定量免疫层析法,化学发光免疫分析法等。

参考文献
[1] 黄建央, 沈敏敏, 刘东海. 血清淀粉样蛋白A两种检测方法相关性的比对及相关疾病样本检测结果分析[J]. 检验医学, 2014, 29(5):574-575.
[2] 杨红玲, 郑磊, 周才, et al. 胶体金渗滤法检测血清淀粉样蛋白A方法评价及其在儿童感染性疾病诊断中的应用[J]. 中华检验医学杂志, 2014, 37(11):836-841.
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