联系我们

降钙素原(PCT)的检测方法

1. 免疫荧光法

免疫荧光法是一种定量的免疫学检测方法。根据高特异性抗原和抗体的反应,预先在聚酯膜上包被的有金标记降钙素原(PCT)的单克隆抗体和样本中的降钙素原结合,在毛细的效应下,结合物向上层析,用免疫定量的分析仪对检测区进行扫描,取得相应发光信号。荧光信号的强度与标本PCT浓度成正比,同时测定已知PCT浓度的标准品,制备标准曲线,从而定量得到标本的PCT浓度。这种方法操作方便、线性范围宽、精密度高、重复性较好,被广泛应用于实验室。但也有一定的局限性,有时会出现假阴性和假阳性的结果。

2. 免疫化学发光法

免疫化学发光法是运用双单克隆抗体,其中一个抗体为降钙素抗体,另一个为抗钙素抗体,分别结合到PCT分子的降钙素和抗钙素部位,可排除交叉反应。其中一个抗体是光标记的,另一个未标记的抗体固定在试管的内壁,反应过程中两个抗体与PCT分子结合而形成三明治复合体,发光部位于反应管的表面。该法操作简便,特异性强,敏感性高,测定的低限值为0.1ng/mL,2h可以出结果。

3. 胶体金免疫层析法

胶体金免疫层析法是一种半定量的检测方法,包括胶体金标记的抗抗钙素的单克隆抗体和用作包被的抗降钙素多克隆抗体,当标本(血清或血浆)加人标本孔,金标单克隆抗体与标本中的PCT结合,形成金标记的抗原抗体复合物。该复合物在反应膜上移动,与固定在膜上的抗降钙素抗体结合形成更大的复合物。当PCT高于检测下限时,夹心复合物呈红色带,颜色深浅与样品中的PCT浓度成正比。未结合的示踪物扩增到对照区,结合并产生红色的对照色带。

半定量PCT检测有方法简单、报告结果快、不受标本数量和特殊设备限制等优点,然而由于半定量检测需要肉眼观察色带,不同操作者的判断可能截然不同,尤其是接近阳性下限时比较难判断,有时可能误导临床医生的治疗。比较适合急诊科、ICU等重症监护患者的定性判断。

4. 乳胶增强免疫比浊法

乳胶增强免疫比浊法中,聚苯乙烯颗粒表面修饰有抗体,当检测样品中有降钙素原(PCT)存在时,基于免疫沉淀反应原理形成不溶性免疫复合物。胶乳增强免疫比浊成本低,性能良好,灵敏度高,操作简便,更适合临床推广应用。

5. 放射免疫学分析法

利用人工合成降钙素原(PCT)多抗特异性地识别并连接合成氨基酸PCT。此方法检测的血清PCT浓度可精确到4pg/ml,既能检测游离PCT,又能检测结合性的PCT。该方法与酶免法、免疫化学发光法相比,虽提高了检测的灵敏度,但检测过程耗时长,需9-12h,并带有放射性元素的污染,故临床应用受到限制。

6. 酶联免疫及其他检测方法

酶联免疫法应用双抗体夹心法测定人降钙素原(PCT)水平。用纯化的人降钙素(PCT)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入降钙素(PCT),再与HRP标记的降钙素(PCT)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的降钙素(PCT)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算人降钙素(PCT)浓度。

7. 其它检测方法

另外还有凝胶层析法以及高效液相色谱分析法,这两种方法检测结果精确,但比较耗时,费用昂贵,因此限制了它们在临床的试用。

参考文献
[1] 徐爱蕾, 王为. 降钙素原检测方法学和临床意义的研究进展[J]. 临床军医杂志, 2012, 40(1):242-244.
[2] 高红军, 郑敏, 周艳秋, et al. 两种降钙素原检测方法的比较研究[J]. 中国医药导报, 2011, 08(32):86-87.
[3] 吴金斌, 郑若洋, 欧嘉文. 定量检测降钙素原的方法学评价[J]. 检验医学与临床, 2015(6):780-782.
[4] 杨泽权. 降钙素原乳胶增强免疫比浊法与免疫荧光法的相关性[J]. 国际检验医学杂志, 2016(3):416-417.
[5] 李秉忠, LIBing-zhong. 免疫比浊法与免疫荧光定量分析法测量血清降钙素原比较[J]. 中外医学研究, 2015(21):68-69.
相关产品

 相关产品

相关文章

 相关文章